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iTRAQ( Isobaric Tag for Relative and Absolute Quantitation)和TMT( Tandem Mass Tag)分别是由AB SCIEX和Thermofisher开发的、用于标记肽段并结合LC-MS实现对多个样品的蛋白质组进行相对定量的试剂盒。iTRAQ有4标和8标两种规格,TMT有2标、6标和10标等三种规格。

iTRAQ
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iTRAQ和TMT的技術原理一樣,所不同的是二者的分子結構有差異。與SILAC相比(標記蛋白質),iTRAQTMT是對肽段進行標記的。依據iTRAQ/TMT標簽的質量數差異,通過MS實現對多組樣品中的蛋白質進行相對定量:

SILAC是通过MS( MSl)对蛋白质进行定量,而iTRAQ/TMT是通过二级MS( MS/MS.MS2)进行定量的;

iTRAQ/TMT能兼容所有來源的蛋白質樣品,並且能同時分析多達8-10組的樣品,分析通量高。

試驗流程

1、分別提取蛋白質並定量;

2、Trypsin分別對蛋白進行酶解,提取肽段;

3、用不同質量數的iTRAQ/TMT標簽分別對肽段樣品進行標記:

4、標記完成後,混合樣品,用SCX進行組分分離(15-20組分);

5、對每個組分進行LC-MS分析:

6、蛋白質鑒定與定量分析,篩選差異表達的蛋白;

7、生物学实验验证(Western blot,EUSA等):



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