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複雜蛋白質樣品的高效分離是提高MS對蛋白質鑒定覆蓋度的重要因素。2D-Gel技術是依據蛋白質等電點(iso- electric point)和分子量的差异,通过等电聚焦(IEF)和SDS-PAGE的二维分离,不同性质的蛋白质以点状的形式( spot)分布在凝胶上; 樣品通過2D-Gel分離後,每個點上的蛋白質複雜度急劇降低。因此,凝膠上的蛋白質酶解後,不需要再進行LC分离,可以直接进行MALDI-TOF MS分析,从而缩短实验周期和降低MS测试费用;

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複雜蛋白質樣品的高效分離是提高MS對蛋白質鑒定覆蓋度的重要因素。2D-Gel技術是依據蛋白質等電點(iso-

electric point)和分子量的差异,通过等电聚焦(IEF)和SDS-PAGE的二维分离,不同性质的蛋白质以点状的形式( spot)分布在凝胶上;
樣品通過2D-Gel分離後,每個點上的蛋白質複雜度急劇降低。因此,凝膠上的蛋白質酶解後,不需要再進行LC分离,可以直接进行MALDI-TOF MS分析,从而缩短实验周期和降低MS测试费用;
2D-Gel技術兼容所有來源的蛋白質樣品(細胞、組織、體液等);

2D-gel结合MALDI-TOF MS,主要用于差异蛋白质组分析。

實驗流程:

1、蛋白質提取及定量;
2、蛋白質分別進行2D-Gel電泳及染色;
3、掃描圖片,用軟件對圖像進行分析,尋找差異點:
4、切割差异点,Trypsin酶解,提取肽段,MALDI-TOF MS完成蛋白质鉴定;
5、数据筛选,挑选蛋白质进行验证(Western blot等)。

                                    





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