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質粒提取:质粒抽提方法即去除 RNA,将质粒与**基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。

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質粒提取時應該注意:1、搖菌時間:過液培養是一個普遍接受的概念,而且適合大部分情況。如果出現了問題,調整培養時間會有幫助:Nick 多,則增加培養時間;酶切出現問題,則減少培養時間。

2、起始菌體量:大家習慣說“從多少 ml 菌液中抽提質粒”,但要養成每次都觀察菌體量的習慣,因爲質粒畢竟是在菌體中,而且,抽提質粒所用的試劑量,都只與菌體量有關。

3、菌體的懸浮:如果沒有懸浮菌體,則殘留的菌體團塊在溶液 II 加入後,變成一個外圍裂解,往裏不裂解,中間沒有裂解的團塊。這個團塊在溶液 III 加入後,會有一部分蛋白質繼續存在于溶液中,成爲蛋白質殘留的大根源。

4、使用相對過量的試劑:這是適合所有核酸抽提的建議。試劑相對過量的好處是:穩定性好,純度高,操作更簡單。如果認爲這樣不經濟,就少用一點菌體。

5、裂解時間:加入溶液 II 後,混勻,體系好能立即變得清澈。體系如果變得清澈了,馬上加入溶液 III 中和。如果體系不馬上變清澈,下次少用一點菌液,或者多用一點溶液。如今的質粒設計得越來越複雜了,奇怪的現象也越來越多,而所有的奇怪現象,多與裂解時間有關。

6、中和的操作:在1.5ml離心管中加入溶液 III 後,先顛倒兩次,使管底朝上,用指頭彈擊管底數次,再顛倒混勻。效果非常好。

7、中和後的離心去蛋白:要將蛋白質離心下去。如果發現離心後仍然有蛋白質漂浮在液面,繼續離心的效果並不好;而將上清倒入另外一個離心管中,再離心,效果要好許多。

如果你想要了解更多的關于質粒提取的內容,歡迎您的來電,上海達爲科生物將熱情爲您服務。

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